páxina_banner

Valor Ct cuantitativo de fluorescencia de detección de ácidos nucleicos: un parámetro de amor-odio

Valor Ct cuantitativo de fluorescencia de detección de ácidos nucleicos: un parámetro de amor-odio

O "Novo Programa de Diagnóstico e Tratamento da Pneumonía por Virus Coronario (Nova Edición de Ensaio)" utiliza un valor Ct de detección de ácidos nucleicos ≥35 como unha das bases importantes para a liberación da xestión ou a descarga do illamento.Entón, que representa o valor Ct do kit de detección de ácidos nucleicos?¿Son comparables os valores Ct dos diferentes kits?Canto menor sexa o valor Ct, mellor será o rendemento do kit?
O valor Ct (Threshold Cycle, Ct) é o número de ciclos de PCR cando a intensidade do sinal de fluorescencia cuantitativa de fluorescencia en tempo real supera o limiar establecido.Os kits de detección de ácidos nucleicos toman a nova coroa como exemplo.Para a mesma reacción do mesmo kit para detectar dúas mostras que conteñen virus, A e B, o tamaño do valor Ct representa, ata certo punto, o número de copias do xene viral, é dicir, a carga viral.Canto menor sexa o Ct da mostra B, maior será a carga viral.O valor Ct é inversamente proporcional á carga viral e á súa infecciosidade.Os pros e os contras dos diferentes kits cuantitativos de fluorescencia en tempo real non se poden xulgar unicamente polo tamaño do valor Ct, porque os valores Ct dos diferentes kits non son comparables.A avaliación do rendemento do kit debe medirse a partir dos aspectos de sensibilidade (límite mínimo de detección), especificidade, precisión, estabilidade e aplicación de diagnóstico.Cada fabricante de reactivos ten os seus propios dezaoito tipos de artes marciais e teñen os seus propios poderes máxicos en aplicación, polo que non entrarei en detalles aquí.
Para os instrumentos/sistemas de análise de PCR cuantitativa en tempo real (QPCR) convencionais, a adquisición de valores Ct e o seu uso xeneralizado en aplicacións de detección de patóxenos son familiares para todos.Co desenvolvemento da industria e o avance da tecnoloxía, os equipos e reactivos QPCR atoparon oportunidades e desafíos.Yiou Think Tank (Informe de investigación de 2021 sobre a industria de probas xenéticas de China: tecnoloxía) analizou que a maioría das empresas da industria QPCR do meu país afrontan problemas comúns baseados na tecnoloxía.En resposta a estes problemas, as solucións divídense principalmente en dous tipos: acelerar a mellora da tecnoloxía e implantar novas tecnoloxías.
POCT para o diagnóstico molecular QPCR é unha das direccións de desenvolvemento da industria, e a mellora do rendemento é un factor importante para acelerar a aplicación da tecnoloxía.Para equipos POCT con rendemento de mostra única de QPCR, como optimizar o valor Ct do parámetro clave dunha única reacción en I+D?O mesmo equipo, o mesmo sistema de reacción e a mesma concentración de molde, teoricamente canto maior sexa o valor de Ct dunha única reacción, menor será a eficiencia do encima na reacción.
No proceso de mellora da eficiencia da reacción enzimática e optimización do valor Ct, pódese analizar primeiro unha curva de amplificación cuantitativa de fluorescencia típica de ciclos de PCR de 40.A curva de amplificación da figura seguinte divídese en fase de fondo de fluorescencia, fase de amplificación exponencial, fase lineal e fase meseta.Para conseguir un fondo de fluorescencia máis baixo, na medida do posible para distinguilo do valor de fluorescencia da amplificación exponencial precoz, é necesario probar a partir do portador de consumibles de reacción, o cribado do deseño da sonda de cebador e o sistema tampón de reacción.O período de amplificación exponencial é a reacción máis directa da actividade enzimática, e tamén é a proba da perfecta coordinación dos equipos POCT, os portadores de reacción e os reactivos.Neste momento, o control da temperatura dos equipos, a adquisición e análise de sinais ópticos, a biocompatibilidade do portador e o rendemento do sistema dos reactivos deben ser axustados e probados en todos os aspectos.Finalmente, complétase toda a amplificación e os resultados deben ser presentados mediante un algoritmo de datos rigoroso para obter un valor Ct razoable.
Liña CT
Un pequeno paso na optimización do valor Ct son os innumerables pasos do persoal de I+D.Na ansiedade e a ilusión do día e da noite, cada vez “as montañas e ríos non se ven por ningures, os salgueiros son escuros e as flores son brillantes e hai outra aldea”, que nos dá coraxe e paixón para seguir adiante. de novo.


Hora de publicación: 29-09-2022